警示——本标准所用的乙腈、二氯甲烷、正己烷以及苯并[a]芘标准溶液对人体均具有一定的毒性，应尽量避免与这些化学品的直接接触，尽量设置专用操作台进行操作，使用者有责任采取适当的安全防护措施,并保证符合国家有关法规规定的条件。

一、　原理

采用二氯甲烷提取吸附在可吸入颗粒物上的苯并[a]芘，经净化、浓缩、过滤后使用配备荧光检测器的高效液相色谱仪分离测定。根据保留时间定性，外标法定量。

二、试剂和材料

1    乙腈：色谱纯。

2    2　二氯甲烷：色谱纯。

3　正己烷：色谱纯。

4　二氯甲烷-正己烷混合溶液：二氯甲烷+正己烷=（3 + 7），现用现配。

5　苯并[a]芘标准溶液（r = 100 µg/mL）：直接购买溶剂为乙腈的有证标准溶液。

三、　仪器和设备

四、　样品采集及保存

D.4.1　样品采集

如采用玻璃纤维滤膜采样，需用铝箔纸将滤膜包好，并留有开口，放入马弗炉中400 ℃烘烤5 h，去除有机物及增加滤膜韧性。注意滤膜不能有折痕。石英滤膜不需要烘烤。室内空气采样点的布设、采样时间、频率应满足附录A的要求。样品的采集参照附录E。

D.4.2　样品保存

    采样后将滤膜置于保存盒中保存，避光运输，运输过程温度过高（如超过30 ℃）时，建议采取加冰袋等适当的降温措施。样品在4 ℃密封避光保存时，需于7 d内完成苯并[a]芘提取；在-15 ℃以下密封避光保存时，需于30 d内完成苯并[a]芘提取。

D.5　分析步骤

D.5.1　推荐分析条件

根据实验室仪器设备的具体情况确定色谱条件。实验前需在超声仪中将流动相脱气；执行完开机步骤后，在实验条件下平衡仪器及色谱柱不少于30 min。梯度洗脱程序：以多环芳烃专用色谱柱为例，采用乙腈+水（3 + 7）到18 min，增量至100% 乙腈，保持至30 min，到32 min梯度变为乙腈 + 水（7 + 3），保持至出峰完毕。流动相流量：1.0 mL/min。柱温：30 ℃。推荐荧光检测器的波长：激发波长305 nm，发射波长480 nm。

D.5.2　校准

D.5.2.1　标准系列的制备

取一定量苯并[a]芘标准溶液用乙腈逐级稀释至1 μg/mL，现用现配，并以乙腈为溶液制备标准系列，浓度分别为2.5 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL，上机测定。

D.5.2.2　校准曲线的绘制

将10 μL标准系列溶液注入液相色谱，得到不同浓度苯并[a]芘的色谱图。以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制校准曲线。校准曲线的相关系数≥0.999，否则重新绘制校准曲线。

图 D.1 苯并[a]芘参考色谱图

D.5.3　测定

D.5.3.1　样品提取

将采样滤膜剪碎后放入具塞比色管中，加入5 mL二氯甲烷，盖好盖后使用涡旋仪混合均匀，在水浴中超声15 min转移至浓缩装置中，重复提取步骤，共提取三次，合并提取液，待浓缩。超声时注意避光及控制温度（30 ℃以下）。

D.5.3.2　样品浓缩

3　如果样品不需要净化，将样品提取液用浓缩装置浓缩至近干，用乙腈溶解，定容至0.5 mL，用针式过滤器过滤到样品瓶中，进样并测定。

如果样品需要净化，将样品提取液用浓缩装置浓缩至1 mL，待净化。

D.5.3.3　样品净化

将硅胶固相萃取柱固定于净化装置，先用4 mL二氯甲烷冲洗柱床，弃去流出液，然后用10 mL正己烷冲洗柱床，当正己烷充满柱床后关闭流速控制阀，浸润5 min后打开控制阀，当正己烷液面下降至稍高于柱床时，关闭控制阀并弃去流出液。将浓缩后的样品提取液转移至柱内，用1 mL二氯甲烷-正己烷混合溶液洗涤样品瓶2次，将洗涤液一并转移至柱内，接收流出液，继续使用8 mL二氯甲烷-正己烷混合溶液洗脱，待洗脱液流过净化柱后关闭流速控制阀，浸润5 min，再打开控制阀，接收洗脱液至完全流出。将洗脱液按照D.5.2的方法浓缩至近干，用乙腈溶解，定容至0.5 mL，转移至样品瓶中待测。

D.5.3.4　样品分析

取10 μL待测样品注入高效液相色谱仪中。记录色谱峰的保留时间和峰面积。在分析样品的同时，应测定现场空白、实验室空白，按与样品测定相同步骤分析，检查分析过程中是否有污染。

D.6　结果计算与表示

D.6.1　采样体积计算

实际采样体积计算方法如公式（D.1）所示。

式中：

Vr —— 采样体积，L；

 Q —— 采样流量，L/min；

 t —— 采样时间，min。

D.6.2　结果计算

    按公式（D.2）计算样品中多环芳烃的质量浓度

  式中：

ρ     —— 样品中苯并[a]芘的质量浓度，ng/m3；

ρi            —— 从校准曲线得到的苯并[a]芘质量浓度，ng/mL；

V     —— 样品提取液体积，mL；

DF   —— 稀释因子（苯并[a]芘的浓度超出校准曲线范围时，进行稀释的倍数）；

n     —— 滤膜的切割份数；

Vi           —— 实际采样体积，m3。

D.6.3　结果表示

当测定结果小于1.00 ng/m3时，保留到小数点后二位，大于等于1.00 ng/m3时，保留三位有效数字。

D.7　方法特性

D.7.1　检出限

10　方法检出限为0.04 ng/m3，测定下限为0.15 ng/m3。

D.7.2　精密度和回收率

实验室内苯并[a]芘的相对标准偏差范围为：1.2 % ~ 5.8 %。对实际样品进行加标回收率测定，加标量为0.05 µg、0.20 µg和0.50 µg时，加标回收率分别为89.3% ~ 94.4%、88.8% ~ 98.7%、87.3% ~ 95.7%。

11　D.8　质量保证和控制

校准曲线的线性相关系数≥0.999，否则重新绘制校准曲线。校准曲线核查的浓度为曲线中间点，即对标准系列中10 ng/mL、20 ng/mL的浓度点进行测试，以检验校准曲线是否有偏离，每日一次。

按公式（D.3）计算相对偏差（RD）：

式中：

RD   —— ρc与校准点ρi的相对偏差，%；

ρc           —— 测定的该校准点的质量浓度。

ρi            —— 校准点的质量浓度；

如果RD的绝对值 ≤ 10%，则初始校准曲线仍能继续使用；如果RD的绝对值 ＞ 10%，应重新绘制新的校准曲线。

D.9　安全注意事项

D.9.1　实验操作过程中应注意个人防护，佩戴如手套、口罩等，样品前处理过程应在通风橱中进行。

D.9.2　实验人员应当经过相关操作培训和安全培训，包括：所用有机溶剂、苯并[a]芘的理化性质及健康毒性、样品前处理的操作，仪器操作和基本维护，基本电气常识、健康防护等。

D.9.3　为了避免实验废物排放对周边环境的污染，废弃溶剂、试剂、玻璃器皿、实验耗材等不能随意丢弃，应单独存放，定期交由有资质的单位处理。

15　D.9.4　苯并[a]芘为致癌物质，在实验操作中应注意防护，实验残余物应妥善处理。