一、检测方法原理

本方法参考标准 GA/T 842—2019，利用酒精(以下称乙醇)的易挥发性，以叔丁醇为内标，用顶空气相色谱火焰离子化检测器进行检测；经与平行操作的乙醇标准品比较，以保留时间或相对保留时间定性，用内标法以乙醇对内标物的峰面积比进行定量分析。

二、试剂

本标准所用试剂除另有说明外均为色谱纯，试验用水为二级水（见 GB/T 6682-2008 规定）：

a） 乙醇；

b） 叔丁醇；

c） 乙醇标准工作溶液：精密吸取或称取无水乙醇标准品适量，用水配成1000 mg/100 mL乙醇储备液，密封，冷藏保存，使用期6个月。将乙醇储备液按倍数用水稀释制成试验中所用系列浓度的乙醇标准工作溶液，使用期3个月；

d） 叔丁醇内标工作溶液：精密吸取或称取叔丁醇标准品适量，用水配成4 mg/100 mL叔丁醇内标

工作溶液，密封，冷藏保存，使用期3个月。

三、实验器材：

四、操作方法

4.1 案件样品制备

取0.10 mL待测全血及0.50 mL叔丁醇内标工作溶液加入样品瓶内，盖上硅橡胶垫，用密封钳加封铝

帽，混匀，待测。

4.2 空白样品和添加样品制备

取1 mg/100 mL乙醇标准工作溶液0.10 mL及叔丁醇内标工作溶液0.50 mL加入样品瓶内作为检测限

添加样品，另取空白全血0.10 mL及叔丁醇内标工作溶液0.50 mL加入样品瓶内作为空白样品。按4.1

方法操作，与案件样品进行平行对照分析。

五、气相色谱仪实验条件

柱箱温度：40℃

汽化温度：200℃

检测器温度;250℃

柱压：0.1MPa

六、顶空进样分析参考条件顶空自动进样器参考条件

a) 加热箱温度：65 ℃；

b) 定量环温度：105 ℃；

c) 传输线温度：110 ℃；

d) 样品瓶加热平衡时间：10.00 min；

e) 样品瓶加压时间：0.10 min；

f) 定量环充满时间：0.10 min；

g) 定量环平衡时间：0.05 min；

h) 进样时间：1.00 min。

七、 定量分析

1 样品制备

1.1 案件样品制备

取0.10 mL待测全血两份，分别添加0.50 mL叔丁醇内标工作溶液，样品制备同7.1.1.1。

1.2 校准曲线制备

配置系列浓度的乙醇标准工作溶液。取系列浓度的各标准工作溶液0.10 mL及叔丁醇内标工作溶液

0.50 mL，分别加入样品瓶内，样品制备同7.1.1.1。

制备校准曲线的乙醇标准工作溶液系列浓度应不少于六个阶梯浓度，且待测样品乙醇的浓度应在校

准曲线的线性范围内。

1.3 校准曲线

用系列浓度的标准工作溶液样品中的乙醇与叔丁醇峰面积之比对乙醇质量浓度进行线性回归，得线

性方程。

1.4 计算相对相差

平行操作的两份案件样品乙醇含量的相对相差

八、 结果评价

1． 阳性结果

空白样品中未出现乙醇的色谱峰为正常，添加样品中同时出现乙醇和叔丁醇的色谱峰为正常。空白

和添加样品正常，案件样品中色谱峰的相对保留时间(或保留时间)与添加样品中乙醇的相对保留时间

(或保留时间)比较，相对误差在±2%内，经选择不同的色谱条件检测，结果一致时，则认定案件样品中

含有乙醇。

2． 阴性结果

空白和添加样品正常，案件样品的叔丁醇色谱峰正常，而无乙醇的色谱峰时，则认定检验结果为阴

性。若空白和（或）添加样品结果异常，说明操作有误，结果无效，应重新检验。

3． 检出限

本方法测定血液中乙醇的检出限为1 mg/100 mL。

4.  定量结果评价

4.1 校准曲线

乙醇含量校准曲线的线性相关系数r不小于0.999，校准曲线有效。

4.2 定量结果

平行测定的两份案件样品测定结果的相对相差不超过10％（有凝血块的血样不得超过15%）时，定

量结果有效，定量结果按两份案件样品测定结果的平均值计算，否则需要重新进行测定。

4.3 定量限

本方法测定血液中乙醇的定量限为5 mg/100 mL。案件样品定性分析结果为阳性，定量分析乙醇含

量小于5 mg/100 mL时，检测结果为血中检出乙醇，其含量小于5 mg/100 mL。

九、标准系列配置

1.   乙醇标准溶液的配置：

在100mL容量瓶中加入约50mL的二次蒸馏水，吸取5.08毫升（也可以用天平称重）乙醇加入容量瓶中，用水定容至刻度线，所得浓度为40mg/mL。可以低温密闭保存6个月。

2. 乙醇校正曲线标准溶液的配置：

2.1  2.2  在100mL容量瓶中加入约50mL的二次蒸馏水，吸取0.5mL浓度为20mg/mL乙醇标准溶液加入容量瓶中，用水定容至刻度线，所得浓度为0.2mg/mL。可以低温密闭保存3个月。

2.2  在100mL容量瓶中加入约50mL的二次蒸馏水，吸取1.25mL浓度为20mg/mL乙醇标准溶液加入容量瓶中，用水定容至刻度线，所得浓度为0.5mg/mL。可以低温密闭保存3个月。

2.3  在100mL容量瓶中加入约50mL的二次蒸馏水，吸取2mL浓度为20mg/mL乙醇标准溶液加入容量瓶中，用水定容至刻度线，所得浓度为0.8mg/mL。可以低温密闭保存3个月。

2.4 在100mL容量瓶中加入约50mL的二次蒸馏水，吸取2.5mL浓度为20mg/mL乙醇标准溶液加入容量瓶中，用水定容至刻度线，所得浓度为1.0mg/mL。可以低温密闭保存3个月。

2.5  在100mL容量瓶中加入约50mL的二次蒸馏水，吸取5mL浓度为20mg/mL乙醇标准溶液加入容量瓶中，用水定容至刻度线，所得浓度为2.0mg/mL。可以低温密闭保存3个月。

2.6 在100mL容量瓶中加入约50mL的二次蒸馏水，吸取7.5mL浓度为20mg/mL乙醇标准溶液加入容量瓶中，用水定容至刻度线，所得浓度为3.0mg/mL。可以低温密闭保存3个月。

3.  叔丁醇标准溶液配置：

在100mL容量瓶中加入约50mL的二次蒸馏水，吸取256ul(移液器吸取)叔丁醇加入容量瓶中，用水定容至刻度线，所得浓度为2mg/mL。可以低温密闭保存6个月。

在100mL容量瓶中加入约50mL的二次蒸馏水，吸取2mL浓度为2mg/mL叔丁醇标准溶液加入容量瓶中，用水定容至刻度线，所得浓度为40ug/mL。可以低温密闭保存3个月。

九、仪器图片

十、实验谱图及其线性

十一、部分客户数据

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